背景技術(shù)：
1、單域抗體(sdab)，也稱為納米抗體，是由單個(gè)單體可變抗體結(jié)構(gòu)域組成的抗體片段。與完整抗體一樣，它能夠選擇性地結(jié)合至特定抗原。單域抗體的分子量?jī)H為12-15kda，比普通抗體(150-160kda)小得多。鑒于其小尺寸和單鏈性質(zhì)，單域抗體可以特別適合于作為片段包含在其他蛋白中，如雙特異性抗體。
2、對(duì)程序性死亡配體1(pd-l1)(也稱為分化簇274(cd274)或b7同源物1(b7-h1))具有特異性的抗體正被用于癌癥治療和其他臨床應(yīng)用中。pd-l1是40kda的1型跨膜蛋白，其被認(rèn)為在諸如妊娠、組織同種異體移植、自身免疫性疾病和其他疾病狀態(tài)(如肝炎)的特定事件期間在抑制免疫系統(tǒng)中起主要作用。pd-l1與pd-1或b7.1的結(jié)合傳遞抑制信號(hào)，該抑制信號(hào)減少淋巴結(jié)中的cd8+t細(xì)胞的增殖；此外，pd-1還能夠通過(guò)細(xì)胞凋亡控制淋巴結(jié)中外源性抗原特異性t細(xì)胞的積累，所述細(xì)胞凋亡進(jìn)一步由bcl-2基因的下調(diào)所介導(dǎo)。
3、除了治療癌癥外，pd-l1抑制在治療傳染性疾病方面也顯示出了潛力。在細(xì)胞內(nèi)感染的小鼠模型中，單核細(xì)胞增生李斯特氏菌(l.monocytogenes)在t細(xì)胞、nk細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中誘導(dǎo)pd-l1蛋白表達(dá)。pd-l1阻斷(例如，使用阻斷抗體)導(dǎo)致受感染的小鼠的死亡率增加。pd-l1阻斷會(huì)減少巨噬細(xì)胞產(chǎn)生tnfα和一氧化氮，減少nk細(xì)胞產(chǎn)生顆粒酶b，并降低單核細(xì)胞增生李斯特氏菌抗原特異性cd8?t細(xì)胞(而不是cd4?t細(xì)胞)的增殖。該證據(jù)表明pd-l1在細(xì)胞內(nèi)感染中充當(dāng)陽(yáng)性共刺激分子。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本公開(kāi)提供靶向人pd-l1蛋白的新的單域抗體和親和力成熟的對(duì)應(yīng)物。盡管它們的小尺寸，但這些單域抗體表現(xiàn)出優(yōu)異的結(jié)合親和力和生物學(xué)功能。當(dāng)包括在各種不同形式的多特異性抗體時(shí)，所得的一些多特異性抗體表現(xiàn)出優(yōu)異的特性。
2、本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案提供了一種單域抗體或包含所述單域抗體的多肽，其中所述單域抗體對(duì)人pd-l1蛋白具有結(jié)合特異性并且包含互補(bǔ)決定區(qū)1(cdr1)、cdr2和cdr3，其中：
3、(1)cdr1包含seq?id?no:54或95的氨基酸序列；
4、cdr2包含seq?id?no:55或96的氨基酸序列；并且
5、cdr3包含seq?id?no:56、97、98、99、100、101、102或103的氨基酸序列，其中所述cdr1、cdr2和cdr3分別不包含seq?id?no:54-56的序列；或者
6、(2)cdr1包含seq?id?no:57或90的氨基酸序列；
7、cdr2包含seq?id?no:58或91的氨基酸序列；并且
8、cdr3包含seq?id?no:59、92、93或94的氨基酸序列，其中所述cdr1、cdr2和cdr3分別不包含seq?id?no:57-59的序列。
9、在一些實(shí)施方案中，所述cdr1、cdr2和cdr3分別包含：
10、(1)seq?id?no:90、58和59；
11、(2)seq?id?no:57、91和59；
12、(3)seq?id?no:57、58和92；
13、(4)seq?id?no:57、58和93；
14、(5)seq?id?no:90、58和92；
15、(6)seq?id?no:90、58和93；
16、(7)seq?id?no:57、91和92；
17、(8)seq?id?no:57、91和93；
18、(9)seq?id?no:57、58和94；
19、(10)seq?id?no:90、91和94；
20、(11)seq?id?no:90、91和92；或
21、(12)seq?id?no:90、91和93。
22、在一些實(shí)施方案中，所述抗體或多肽包含與seq?id?no:53具有至少85％序列相同性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體或多肽包含seq?id?no:53的框架區(qū)。
23、在一些實(shí)施方案中，所述cdr1、cdr2和cdr3分別包含seq?id?no:57、91和93。在一些實(shí)施方案中，所述抗體或多肽包含seq?id?no:67的氨基酸序列。
24、在一些實(shí)施方案中，所述cdr1、cdr2和cdr3分別包含seq?id?no:90、91和92。在一些實(shí)施方案中，所述抗體或多肽包含seq?id?no:70的氨基酸序列。
25、在一些實(shí)施方案中，所述cdr1、cdr2和cdr3分別包含：
26、(13)seq?id?no:95、55和56；
27、(14)seq?id?no:54、96和56；
28、(15)seq?id?no:54、55和97；
29、(16)seq?id?no:54、55和98；
30、(17)seq?id?no:54、55和99；
31、(18)seq?id?no:95、55和97；
32、(19)seq?id?no:95、55和98；
33、(20)seq?id?no:95、55和99；
34、(21)seq?id?no:54、96和97；
35、(22)seq?id?no:54、96和98；
36、(23)seq?id?no:54、96和99；
37、(24)seq?id?no:95、96和97；
38、(25)seq?id?no:95、96和98；
39、(26)seq?id?no:95、96和99；
40、(27)seq?id?no:95、96和100；
41、(28)seq?id?no:54、55和101；
42、(29)seq?id?no:54、55和102；或
43、(30)seq?id?no:54、55和103。
44、在一些實(shí)施方案中，所述抗體或多肽包含與seq?id?no:42具有至少85％序列相同性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述抗體或多肽包含seq?id?no:42的框架區(qū)。
45、在一些實(shí)施方案中，所述cdr1、cdr2和cdr3分別包含seq?id?no:95、96和100。在一些實(shí)施方案中，所述抗體或多肽包含seq?id?no:86的氨基酸序列。
46、在一個(gè)實(shí)施方案中，還提供了一種多特異性抗體，其包含本公開(kāi)的抗體和第二抗體或抗原結(jié)合片段，所述第二抗體或抗原結(jié)合片段對(duì)不是pd-l1的靶抗原具有結(jié)合特異性。在一些實(shí)施方案中，靶抗原是腫瘤相關(guān)抗原。在一些實(shí)施方案中，第二抗體是完整尺寸的fab抗體。
47、在另一方面，本文提供了一種多核苷酸，其編碼本技術(shù)的抗體或多肽或者本技術(shù)的多特異性抗體。
48、在另一方面，本文提供了一種載體，其包含本技術(shù)的多核苷酸。
49、在另一方面，提供了一種細(xì)胞，其包含本技術(shù)的多核苷酸或載體。
50、在另一方面，本文提供了一種組合物，其包含：(1)本技術(shù)的抗體或多肽、多特異性抗體或者多核苷酸，和(2)藥學(xué)上可接受的載劑。
51、在另一方面，本文提供了一種治療有需要的患者的癌癥的方法，所述方法包括向患者給藥有效量的本技術(shù)的抗體或多肽、多特異性抗體或者多核苷酸。在另一方面，本文提供了本技術(shù)的抗體或多肽、多特異性抗體或者多核苷酸在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療癌癥。在一些實(shí)施方案中，癌癥是實(shí)體瘤。在一些實(shí)施方案中，癌癥選自膀胱癌、肝癌、結(jié)腸癌、直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、白血病、淋巴瘤、胰腺癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、尿道癌、頭頸癌、胃腸道癌、胃癌、食管癌、卵巢癌、腎癌、黑色素瘤、前列腺癌和甲狀腺癌。