本發(fā)明涉及反義寡核苷酸及其治療用途領域。

背景技術：

1、近來，通過使用反義寡核苷酸(aso)調節(jié)突變基因的剪接，實現了遺傳紊亂中基因功能的功能恢復。aso是單鏈、化學修飾的核酸，其結合靶基因的前mrna，并以可以恢復基因功能的方式改變剪接。例如，nusinersen是一種基于aso的藥物，其改變smn2的剪接模式，并成功用于治療脊髓性肌萎縮(sma，parkash?2107；gene?ther)。另一個實例是milasen，一種“n＝1”藥物，其中開發(fā)了一種aso以有效地恢復mfsd8基因中導致巴騰病的特有突變(unique?mutation)的正確剪接(kim等人，2019；n?engl?j?med)。

2、核受體亞家族2組e成員3(nr2e3)基因的缺陷導致一系列遺傳性視網膜紊亂，包括增強s視錐綜合征(escs)、色素性視網膜炎、goldmann-favre綜合征(gfs)和團塊狀色素性視網膜變性(clumped?pigmentary?retinal?degeneration)(cprd)(mollema和haider2010；exp?eye?res)。nr2e3是以配體依賴性方式調節(jié)轉錄的核受體超家族的成員。nr2e3的表達僅限于人類中視網膜光感受器，并可能以多種能力發(fā)揮功能：1)作為指導有絲分裂后細胞分化為視桿細胞的激活劑；2)作為影響視網膜祖細胞能力和視網膜發(fā)育的阻遏物；和3)成體視桿細胞和視錐細胞中光傳導的調節(jié)因子(mollema和haider?2010；exp?eye?res)。

3、nr2e3中相對常見的致病突變是c.932g>a(p.arg311gln)(bandah等人，2009；archophthalmol，clinvarid:5532)。這種突變被歸類為錯義變體，這意味著它導致第311位的精氨酸殘基變?yōu)楣劝滨０窔埢?。這種變化導致明顯疾病表型的機制尚不被完全理解(見roduit等人，2009；plos?one，其中證明這種殘基變化不影響同源二聚化、與crx共阻遏物的相互作用和dna結合)。

4、仍然非常需要適合治療或改善視網膜疾病的化合物，特別是在攜帶c.932g>a突變的受試者中。

技術實現思路

1、在一些實施方式中，本發(fā)明涉及一種剪接調節(jié)nr2e3基因的方法，從而消除或減輕致病突變的影響。

2、在一些實施方式中，本發(fā)明至少部分基于以下發(fā)現，即c.932g>a突變觸發(fā)nr2e3轉錄物的異常剪接，從而導致外顯子6中186個堿基的框內缺失(對應于由nr2e3轉錄物編碼的蛋白質產物中的62個氨基酸)。因此，發(fā)明人建議使用剪接移位/修飾反義寡核苷酸(aso)，以恢復nr2e3轉錄物的天然和/或適當剪接，從而恢復由此編碼的蛋白質產物的功能。

3、根據一個方面，提供了一種治療有需要的受試者中的視網膜疾病的方法，該方法包括向受試者施用治療有效量的至少一種合成反義寡核苷酸(aso)，其中aso誘導包含核受體亞家族2組e成員3(nr2e3)前mrna的第748-933位的核苷酸，從而治療受試者中的視網膜疾病。

4、根據另一個方面，提供了一種組合物，其包含aso，該aso包含14至25個堿基，與nr2e3前mrna具有至少80％的互補性，其特征在于誘導包含nr2e3前mrna的第748-933位的核苷酸。

5、一種用于生產適用于治療視網膜疾病的化合物的方法，該方法包括與nr2e3前mrna的外顯子6結合的化合物，測定在化合物存在的情況下包含nr2e3前mrna的第748-933位的核苷酸，并選擇至少一種誘導包含nr2e3前mrna的第748-933位的核苷酸的化合物。

6、在一些實施方式中，aso包含選自以下的骨架：磷酸核糖骨架、磷酸脫氧核糖骨架、硫代磷酸脫氧核糖骨架、2’-o-甲基硫代磷酸骨架、磷酸二酰胺嗎啉基骨架、肽核酸骨架、2-甲氧基乙基硫代磷酸骨架、交替鎖核酸骨架、硫代磷酸骨架、n3’-p5’磷酸酰胺、2’-脫氧-2’氟代-β-d-阿拉伯核酸、環(huán)己烯核酸骨架核酸、三環(huán)dna(tcdna)核酸骨架及其組合。

7、在一些實施方式中，aso包含14至25個堿基。

8、在一些實施方式中，aso與衍生自以下多核苷酸序列的核酸序列的等長部分具有至少75％的互補性：gtgatcctgctggaagaggcgtggagtgaactctttctcctcggggccatccagtggtctctgcctctggacagctgtcctctgctggcaccgcccgaggcctctgctgccggtggtgcccagggccggctcacgctggccagcatggagacgcgtgtcctgcaggaaactatctctcggttccgggcattggcggtggaccccacggagtttgcctgcatgaaggccttggtcctcttcaagccag(seq?id?no:1)。

9、在一些實施方式中，aso與gcaggaaactatctctcggttccaggcattggcggtggaccccacggagt(seq?id?no:2)具有至少75％的互補性。

10、在一些實施方式中，受試者在nr2e3的外顯子6中包含至少一個框內和/或錯義突變。

11、在一些實施方式中，該至少一個突變?yōu)閏.932g>a。

12、在一些實施方式中，aso包括化學修飾的骨架。

13、在一些實施方式中，化學修飾的骨架包括：磷酸核糖骨架、磷酸脫氧核糖骨架、硫代磷酸脫氧核糖骨架、2’-o-甲基硫代磷酸骨架、磷酸二酰胺嗎啉基骨架、肽核酸骨架、2-甲氧基乙基硫代磷酸骨架、交替鎖核酸骨架、硫代磷酸骨架、n3’-p5’磷酸酰胺、2’-脫氧-2’-氟代-β-d-阿拉伯核酸、環(huán)己烯核酸骨架核酸、三環(huán)dna(tcdna)核酸骨架及其組合。

14、在一些實施方式中，組合物進一步包含藥學上可接受的載體。

15、在一些實施方式中，其用于在有需要的受試者中誘導包含nr2e3前mrna的第748-933位的核苷酸。

16、在一些實施方式中，受試者在nr2e3前mrna的外顯子6中包含c.932g>a突變。

17、在一些實施方式中，受試者患有視網膜疾病或患視網膜疾病的風險增加。

18、在一些實施方式中，組合物用于治療或預防有需要的受試者中的視網膜疾病。

19、在一些實施方式中，nr2e3前mrna在外顯子6中包含c.932g>a突變。

20、除非另有定義，否則本文使用的所有技術和/或科學術語具有與本發(fā)明所屬領域普通技術人員通常理解的含義相同的含義。盡管在本發(fā)明實施方式的實踐或測試中可以使用與本文所述類似或等效的方法和材料，但下面描述了示例性方法和/或材料。如有沖突，以專利說明書(包括定義)為準。此外，材料、方法和實例僅是說明性的，并不一定是限制性的。

21、通過下文給出的詳細描述，本發(fā)明的進一步實施方式和全部適用范圍將變得顯而易見。然而，應當理解，在指示本發(fā)明的優(yōu)選實施方式的同時，詳細描述和具體實例僅通過說明的方式給出，因為根據該詳細描述，本領域技術人員將清楚本發(fā)明的精神和范圍內的各種變化和修改。