本發(fā)明涉及醫(yī)藥，具體涉及一種klhl24泛素連接酶抑制劑及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、klhl24屬于kelch-like基因家族(kelch-like?family?proteins，klhls)，該基因家族編碼的蛋白具有一個(gè)高度保守的btb結(jié)構(gòu)域和back結(jié)構(gòu)域，這些結(jié)構(gòu)域可與cul3和rbx1互作形成cul3–rbx1–kelch泛素連接酶復(fù)合物。kelch-like蛋白還具有一個(gè)kelch結(jié)構(gòu)域，用于招募底物，決定了其e3連接酶的特異性。klhl24在人體各組織中廣泛表達(dá)，包括皮膚。

2、由本發(fā)明第一發(fā)明人主導(dǎo)的研究首次發(fā)現(xiàn)由于klhl24基因起始密碼子突變產(chǎn)生截短的klhl24-△n28蛋白，該蛋白因自身泛素化程度下降而變得更加穩(wěn)定，從而導(dǎo)致皮膚中大量角蛋白krt14被klhl24泛素化降解，使表皮基底層細(xì)胞變的脆弱和易脫落，最終導(dǎo)致遺傳性大皰性表皮松懈癥的發(fā)生(lin,zhimiao,et?al.stabilizing?mutations?ofklhl24?ubiquitin?ligase?cause?loss?of?keratin?14and?human?skinfragility.nature?genetics48.12(2016):1508-1516.)。后續(xù)研究報(bào)道klhl24的泛素化底物除krt14外，還有krt15、vimentin和desmin。另有研究發(fā)現(xiàn)klhl24突變導(dǎo)致的綜合征表型正在出現(xiàn)。ebs-klhl24患者在出生時(shí)帶有廣泛的裸露皮膚區(qū)域和皮膚脆弱性，隨著時(shí)間的推移，會(huì)發(fā)展成萎縮性瘢痕，同時(shí)伴有危及生命的心肌病(yenamandra,v.k.,etal.cardiomyopathy?in?patients?with?epidermolysis?bullosa?simplex?withmutations?in?klhl24.british?journal?of?dermatology(2018)179(5):1181-1183)。ebs-klhl24患者還可能會(huì)經(jīng)歷脫發(fā)，特別是在皮膚萎縮部位，有時(shí)甚至?xí)绊懡K端毛發(fā)(cui,jun,et?al.klhl24-mediated?hair?follicle?stem?cells?structural?disruptioncauses?alopecia.journal?of?investigational?dermatology(2022)142(8):2079-2087)。可見，開發(fā)針對(duì)klhl24靶點(diǎn)的藥物具有重大意義。

3、然而，目前尚沒有治療因klhl24突變導(dǎo)致的疾病的特異性藥物。因此，建立高通量篩選系統(tǒng)并成功篩選出能特異性結(jié)合和抑制klhl24活性的藥物對(duì)于治療klhl24突變導(dǎo)致的疾病具有重大意義。鑒于klhl24在皮膚和毛發(fā)再生方面的功能，篩選出該抑制劑在維持正常毛發(fā)方面也具有重大意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種klhl24泛素連接酶抑制劑及其應(yīng)用，以及建立了一種klhl24泛素連接酶抑制劑的高通量篩選方法和系統(tǒng)。

2、在本發(fā)明第一方面，提供一種化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體、酯、前藥、溶劑化物或氘代化合物作為klhl24泛素連接酶抑制劑的應(yīng)用，所述化合物具有如下結(jié)構(gòu)：

3、

4、其中，代表單鍵或雙鍵；

5、x選自：o、s、nh；

6、a環(huán)為雜環(huán)；

7、ra為a環(huán)上一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立的取代基，其選自：h、鹵素、羥基、氨基、氰基、硝基、疊氮基、c1-c10烷基、-(c0-c6亞烷基)-(c3-c10環(huán)烷基)、-(c0-c6亞烷基)-(c6-c10芳基)、-(c0-c6亞烷基)-(4-10元雜環(huán)基)、

8、l為與a環(huán)連接的二價(jià)基團(tuán)，其選自：?jiǎn)捂I、h、c1-c6亞烷基、-(c0-c6亞烷基)-o-、-(c0-c6亞烷基)-s-、-(c0-c6亞烷基)-c(o)-、-c(o)-(c0-c6亞烷基)-、-(c0-c6亞烷基)-coo-、-(c0-c6亞烷基)-c(s)-、-(c0-c6亞烷基)-n(c0-c10亞烷基)-、-(c0-c6亞烷基)-con(c0-c10亞烷基)-、-(c0-c6亞烷基)-n(c0-c10亞烷基)co-、-(c0-c6亞烷基)-so2-、-(c0-c6亞烷基)-so-、-(c0-c6亞烷基)-(c3-c10環(huán)烷基)、-(c0-c6亞烷基)-(c6-c10芳基)、-(c0-c6亞烷基)-(4-10元亞雜環(huán)基)，其中所述c0-c6亞烷基、c3-c10環(huán)烷基、c6-c10芳基、4-10元亞雜環(huán)基中的h可任選地被選自以下的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代：鹵素、氰基、硝基、疊氮基、c1-c10烷基、c1-c10鹵代烷基、-o(c0-10烷基)、-s(c0-10烷基)、-so2(c0-10烷基)、-so2n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-coo(c0-10烷基)、-oco(c0-10烷基)、-con(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-co(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)co(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)coo(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)con(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)so2(c0-10烷基)；

9、rc為與l連接的一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立的取代基，其選自：h、鹵素、氰基、硝基、疊氮基、c1-c10烷基、c2-c10烯基、c2-c10炔基、c1-c10鹵代烷基、-o(c0-10烷基)、-s(c0-10烷基)、-so(c0-10烷基)、-so2(c0-10烷基)、-so2n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)co(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)coo(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)con(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)so2(c0-10烷基)、-coo(c0-10烷基)、-oco(c0-10烷基)、con(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-co(c0-10烷基)、-co(c0-c6亞烷基)(4-10元雜環(huán)基)、-(c0-c6亞烷基)-(c3-c10環(huán)烷基)、-(c0-c6亞烷基)-(c6-c10芳基)、-(c0-c6亞烷基)-(4-10元雜環(huán)基)，其中所述c0-c6亞烷基、c1-c10烷基、c2-c10烯基、c2-c10炔基、c3-c10環(huán)烷基、c6-c10芳基、4-10元雜環(huán)基中的h可任選地被選自以下的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代：鹵素、氰基、硝基、疊氮基、c1-c10烷基、c1-c10鹵代烷基、-(c0-c6亞烷基)-(c3-c10環(huán)烷基)、-(c0-c6亞烷基)-(c6-c10芳基)、-(c0-c6亞烷基)-(4-10元雜環(huán)基)、-n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)co(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)coo(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)con(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)so2(c0-10烷基)、-o(c0-10烷基)、-s(c0-10烷基)、-so(c0-10烷基)、-so2(c0-10烷基)、-so2n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-coo(c0-10烷基)、-oco(c0-10烷基)、-con(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-co(c0-10烷基)；

10、rb為苯環(huán)上一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立的取代基，其選自：h、鹵素、氰基、硝基、疊氮基、c1-c10烷基、-(c0-c6亞烷基)-(c3-c10環(huán)烷基)、-(c0-c6亞烷基)-(c6-c10芳基)、-(c0-c6亞烷基)-(4-10元雜環(huán)基)、-(c0-c6亞烷基)-(c1-c10鹵代烷基)、-(c0-c6亞烷基)-(c1-c10鹵代烷氧基)、-(c0-c6亞烷基)-n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-n(c0-10烷基)co(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)coo(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-n(c0-10烷基)con(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-n(c0-10烷基)so2(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-o(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-s(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-so(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-so2(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-so2n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-coo(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-oco(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-con(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-co(c0-10烷基)、-co(c0-c6亞烷基)(4-10元雜環(huán)基)、一氧化氮(no)供體殘基，其中所述c0-c6亞烷基、c1-c10烷基、c2-c10烯基、c2-c10炔基、c3-c10環(huán)烷基、c6-c10芳基、4-10元雜環(huán)基中的h可任選地被選自以下的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代：鹵素、氰基、硝基、疊氮基、c1-c10烷基、c2-c10烯基、c2-c10炔基、-(c0-c6亞烷基)-(c3-c10環(huán)烷基)、-(c0-c6亞烷基)-(c6-c10芳基)、-(c0-c6亞烷基)-(4-10元雜環(huán)基)、c1-c10鹵代烷基、c1-c10鹵代烷氧基、-n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)co(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)coo(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)con(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)so2(c0-10烷基)、-o(c0-10烷基)、-s(c0-10烷基)、-so(c0-10烷基)、-so2(c0-10烷基)、-so2n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-coo(c0-10烷基)、-oco(c0-10烷基)、-con(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-co(c0-10烷基)；或兩個(gè)rb與其所連接的碳原子一起形成脂肪環(huán)、芳環(huán)或雜環(huán)，其中所述脂肪環(huán)、芳環(huán)或雜環(huán)上的h任選地被選自以下的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代：鹵素、氰基、硝基、疊氮基、c1-c10烷基、c2-c10烯基、c2-c10炔基、c1-c10鹵代烷基、-n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-o(c0-10烷基)、-coo(c0-10烷基)、-oco(c0-10烷基)、-con(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-co(c0-10烷基)。

11、具體地，上述一氧化氮(no)供體殘基可選自：-ono2、其中，rh和rk獨(dú)立地選自：h、c1-c10烷基、c1-c10烯基、-(c0-c6亞烷基)-(c6-c10芳基)、-(c0-c6亞烷基)-(4-6元雜環(huán)基)(例如)，或rh和rk與其連接的氮原子一起形成4-6元雜環(huán)基(例如

12、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，x為o。

13、進(jìn)一步地，a環(huán)為5-10元雜環(huán)，其選自：其中，v選自：-s-、-nh-、-ch2-、r1、r2具有上述ra的定義。

14、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述化合物具有如下結(jié)構(gòu)：

15、

16、優(yōu)選為，

17、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，r1為

18、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，r2為

19、進(jìn)一步地，l選自：?jiǎn)捂I、h、c1-c6亞烷基、-(c0-c6亞烷基)-o-、-(c0-c6亞烷基)-s-、-(c0-c6亞烷基)-c(o)-、-c(o)-(c0-c6亞烷基)-、-(c0-c6亞烷基)-coo-、-(c0-c6亞烷基)-n(c0-c10亞烷基)-、-(c0-c6亞烷基)-n(c0-c10亞烷基)co-、-(c0-c6亞烷基)-so2-、-(c0-c6亞烷基)-(c3-c10環(huán)烷基)、-(c0-c6亞烷基)-(c6-c10芳基)、-(c0-c6亞烷基)-(4-10元亞雜環(huán)基)，其中所述c0-c6亞烷基、c3-c10環(huán)烷基、c6-c10芳基、4-10元亞雜環(huán)基中的h可任選地被選自以下的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代：鹵素、氰基、硝基、疊氮基、c1-c10烷基、-o(c0-10烷基)、-coo(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)(c0-10烷基)。

20、優(yōu)選地，l選自：?jiǎn)捂I、c1-c6亞烷基、-(c0-c6亞烷基)-c(o)-、-c(o)-(c0-c6亞烷基)-、-(c0-c6亞烷基)-(c6-c10芳基)、-(c0-c6亞烷基)-(4-10元亞雜環(huán)基)-，其中所述c0-c6亞烷基、c6-c10芳基、4-10元亞雜環(huán)基、中的h可任選地被選自以下的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代：c1-c10烷基、-coo(c0-10烷基)。

21、進(jìn)一步地，rc選自：h、鹵素、氰基、硝基、c1-c10烷基、-o(c0-10烷基)、-s(c0-10烷基)、-so(c0-10烷基)、-so2(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)co(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)coo(c0-10烷基)、-coo(c0-10烷基)、-oco(c0-10烷基)、con(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-co(c0-10烷基)、-co(c0-c6亞烷基)(4-10元雜環(huán)基)、-(c0-c6亞烷基)-(c3-c10環(huán)烷基)、-(c0-c6亞烷基)-(c6-c10芳基)、-(c0-c6亞烷基)-(4-10元雜環(huán)基)，其中所述c0-c6亞烷基、c1-c10烷基、c3-c10環(huán)烷基、c6-c10芳基、4-10元雜環(huán)基中的h可任選地被選自以下的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代：鹵素、氰基、硝基、c1-c10烷基、c1-c10鹵代烷基、-(c0-c6亞烷基)-(c3-c10環(huán)烷基)、-(c0-c6亞烷基)-(c6-c10芳基)、-(c0-c6亞烷基)-(4-10元雜環(huán)基)、-n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)co(c0-10烷基)、-o(c0-10烷基)、-coo(c0-10烷基)、-oco(c0-10烷基)、-con(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-co(c0-10烷基)。

22、優(yōu)選地，rc選自：h、鹵素、c1-c10烷基、-o(c0-10烷基)、-s(c0-10烷基)、-so2(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)coo(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-(c3-c10環(huán)烷基)、-(c0-c6亞烷基)-(c6-c10芳基)、-(c0-c6亞烷基)-(4-10元雜環(huán)基)，其中所述c0-c6亞烷基、c0-10烷基、c3-c10環(huán)烷基、c6-c10芳基、4-10元雜環(huán)基中的h可任選地被選自以下的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代：鹵素、硝基、c1-c10烷基、c1-c10鹵代烷基、-o(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-(4-10元雜環(huán)基)。

23、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，r1選自：h、-f、-cl、-br、-i、

24、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，r2選自：h、-f、-cl、-br、-i、

25、進(jìn)一步地，rb選自：h、鹵素、氰基、硝基、疊氮基、c1-c10烷基、-(c0-c6亞烷基)-(c3-c10環(huán)烷基)、-(c0-c6亞烷基)-(4-10元雜環(huán)基)、-(c0-c6亞烷基)-(c1-c10鹵代烷基)、-(c0-c6亞烷基)-n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-n(c0-10烷基)co(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)coo(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-n(c0-10烷基)so2(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-o(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-so2(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-so2n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-coo(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-oco(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-con(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-co(c0-10烷基)、-co(c0-c6亞烷基)(4-10元雜環(huán)基)，其中所述c0-c6亞烷基、c1-c10烷基、c2-c10烯基、c2-c10炔基、c3-c10環(huán)烷基、c6-c10芳基、4-10元雜環(huán)基中的h可任選地被選自以下的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代：鹵素、氰基、硝基、疊氮基、c1-c10烷基、c2-c10烯基、c2-c10炔基、-(c0-c6亞烷基)-(c6-c10芳基)、-(c0-c6亞烷基)-(4-10元雜環(huán)基)、c1-c10鹵代烷基、-n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)co(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)coo(c0-10烷基)、-o(c0-10烷基)、-coo(c0-10烷基)、-oco(c0-10烷基)、-con(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-co(c0-10烷基)。

26、優(yōu)選地，rb選自：h、鹵素、氰基、硝基、c1-c10烷基、c1-c10鹵代烷基、-o(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)co(c0-10烷基)、-so2(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)so2(c0-10烷基)、-co(c0-10烷基)、-coo(c0-10烷基)、-con(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-co(c0-c6亞烷基)(4-10元雜環(huán)基)、-(c0-c6亞烷基)-(4-10元雜環(huán)基)，其中所述c0-c6亞烷基、c1-c10烷基、4-10元雜環(huán)基中的h可任選地被選自以下的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代：鹵素、c1-c10烷基、c2-c10烯基、c2-c10炔基、-o(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-n(c0-10烷基)coo(c0-10烷基)、-coo(c0-10烷基)、-(c0-c6亞烷基)-(c6-c10芳基)。

27、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，rb選自：h、-f、-cl、-br、-i、-no2、-nh2、-cn、-cooh、-oh、-cf3、

28、

29、-ono2。

30、進(jìn)一步地，兩個(gè)rb與其所連接的碳原子一起形成5-6元脂肪環(huán)、芳環(huán)或雜環(huán)，其中所述5-6元脂肪環(huán)、芳環(huán)或雜環(huán)上的h任選地被選自以下的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代：鹵素、氰基、硝基、c1-c10烷基、c1-c10鹵代烷基、-n(c0-10烷基)(c0-10烷基)、-o(c0-10烷基)、-coo(c0-10烷基)。

31、優(yōu)選地，兩個(gè)rb與其所連接的碳原子一起形成5-6元雜環(huán)。

32、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，兩個(gè)rb與其所連接的碳原子一起形成5-6元雜環(huán)選自：

33、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述化合物具有如下結(jié)構(gòu)：

34、

35、其中，rd選自：h、鹵素、氰基、羥基、羧基、c1-c6烷基、c1-c6鹵代烷基。

36、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，rd為c1-c6烷基，如甲基、乙基。

37、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，rb為一氧化氮(no)供體殘基，如-ono2、

38、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述化合物具有如下結(jié)構(gòu)：

39、

40、在本發(fā)明的第二方面，提供了一種化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體、酯、前藥、溶劑化物或氘代化合物在制備預(yù)防和/或治療klhl24相關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用，所述化合物具有如本發(fā)明第一方面所述化合物的定義。

41、進(jìn)一步地，所述klhl24相關(guān)的疾病為通過抑制或降解klhl24可有益于其預(yù)防和/或治療的疾病，例如klhl24突變(如klhl24基因起始密碼子突變產(chǎn)生截短的klhl24-△n28蛋白)導(dǎo)致的疾病、角蛋白異常性疾病，例如，皮膚病、心血管疾病、腫瘤、消化系統(tǒng)疾病、關(guān)節(jié)炎等，及其并發(fā)癥。

42、進(jìn)一步地，所述皮膚病選自：脫發(fā)、大皰性皮膚病、瘢痕、角化病、紅斑丘疹鱗屑性皮膚病、結(jié)締組織病。

43、進(jìn)一步地，所述大皰性皮膚病選自：大皰性表皮松解癥(如遺傳性大皰性表皮松解癥、獲得性大皰性表皮松解癥)、天皰瘡、大皰性類天皰瘡、瘢痕性類天皰瘡。

44、進(jìn)一步地，所述瘢痕選自：增生性瘢痕、瘢痕疙瘩、萎縮性瘢痕。

45、進(jìn)一步地，所述角化病選自：毛囊角化病、掌跖角皮病、掌跖角化癥，其并發(fā)癥包括皮膚干燥、有鱗屑、皸裂等。

46、進(jìn)一步地，所述紅斑丘疹鱗屑性皮膚病選自：銀屑病、毛發(fā)紅糠疹、紅斑角皮病。

47、進(jìn)一步地，所述結(jié)締組織病選自：紅斑狼瘡、硬皮病。

48、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述疾病為萎縮性瘢痕。

49、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述疾病為遺傳性大皰性表皮松懈癥，及其并發(fā)癥(如食道粘膜狹窄、手指并指攣縮、角膜瘢痕化、眼睛失明)。

50、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述疾病為脫發(fā)。

51、進(jìn)一步地，所述心血管疾病為心肌病(如擴(kuò)張型心肌病、肥厚型心肌病)。

52、進(jìn)一步地，所述腫瘤選自：白血病、結(jié)腸癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、肺癌、肝癌、胃癌、腎上腺皮質(zhì)癌、胰腺導(dǎo)管腺癌、肺腺癌、胰腺癌、性腺母細(xì)胞瘤、多發(fā)性骨髓瘤、套細(xì)胞淋巴瘤、骨肉瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、腦瘤、黑色素瘤。

53、優(yōu)選地，所述腫瘤選自：結(jié)腸癌、前列腺癌、性腺母細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌。

54、更優(yōu)選地，所述腫瘤選自：結(jié)腸癌、前列腺癌。

55、進(jìn)一步地，所述消化系統(tǒng)疾病選自：慢性肝炎、藥物性肝損傷。

56、進(jìn)一步地，所述關(guān)節(jié)炎為骨關(guān)節(jié)炎。

57、進(jìn)一步地，所述疾病的受試者為哺乳動(dòng)物，例如人類。

58、進(jìn)一步地，所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體、酯、前藥、溶劑化物或氘代化合物可單獨(dú)使用，或與其他種類的活性成分聯(lián)合使用。

59、進(jìn)一步地，所述藥物為獸藥或人藥。

60、進(jìn)一步地，所述藥物還包括一種或多種藥學(xué)上可接受的輔料。

61、進(jìn)一步地，所述藥學(xué)上可接受的輔料選自：粘合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、抑菌劑、助懸劑、增溶劑、增稠劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、填充劑、抗氧化劑、緩沖劑。

62、進(jìn)一步地，所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體、酯、前藥、溶劑化物或氘代化合物可以采用任何合適的給藥途徑，例如胃腸道給藥(如口服、舌下、直腸給藥)或非胃腸道給藥(例如，靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、眼內(nèi)、腦內(nèi)、陰道內(nèi)、腹腔、透皮、皮下、皮內(nèi)、滴注、呼吸道給藥等)途徑，所述藥物可以為任何合適的劑型，例如經(jīng)胃腸道給藥劑型(例如，口服劑型)，例如，包括，但不限于，片劑、丸劑、粉劑、顆粒劑、膠囊劑、錠劑、糖漿劑、液體、乳劑、混懸劑等；非經(jīng)胃腸道給藥劑型，例如，注射給藥劑型：如注射劑(例如，用于皮下注射、靜脈注射、肌內(nèi)注射、腹膜內(nèi)注射)，呼吸道給藥劑型：如噴霧劑、氣霧劑、粉霧劑等，皮膚給藥劑型，如外用溶液劑、洗劑、軟膏劑、硬膏劑、糊劑、貼劑等，粘膜給藥劑型：如滴眼劑、眼用軟膏劑、滴鼻劑、含漱劑、舌下片劑等，腔道給藥劑型：如栓劑、氣霧劑、泡騰片、滴劑、滴丸劑等，用于直腸、陰道、尿道、鼻腔、耳道等。

63、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述藥物為皮膚給藥劑型。

64、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述藥物為口服劑型。

65、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述藥物為注射給藥劑型。

66、在本發(fā)明第三方面，提供一種化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體、酯、前藥、溶劑化物或氘代化合物在制備維持毛發(fā)的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

67、進(jìn)一步地，所述產(chǎn)品的受試者為哺乳動(dòng)物，特別是人類，包括健康人和患者。

68、進(jìn)一步地，所述維持毛發(fā)包括促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)、促進(jìn)毛發(fā)再生和自我修復(fù)、延長(zhǎng)毛發(fā)生長(zhǎng)周期、防止脫發(fā)等。

69、進(jìn)一步地，所述產(chǎn)品為藥物、食品、保健品、護(hù)理產(chǎn)品。

70、進(jìn)一步地，所述產(chǎn)品還包括一種或多種輔料。

71、在本發(fā)明第四方面，提供一種klhl24泛素連接酶抑制劑的篩選方法，其包括如下步驟：將待篩選的物質(zhì)與表達(dá)標(biāo)記熒光蛋白的klhl24的細(xì)胞共孵育，檢測(cè)熒光信號(hào)。

72、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述熒光蛋白為gfp。

73、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞為hek293t細(xì)胞。

74、進(jìn)一步地，所述方法還包括計(jì)算和分析的步驟，例如計(jì)算熒光陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)量或比例。

75、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述方法還包括將包含標(biāo)記熒光蛋白的klhl24的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞的步驟。

76、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述表達(dá)載體為質(zhì)粒。

77、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述方法包括：

78、(a)構(gòu)建gfp-klhl24質(zhì)粒；

79、(b)將gfp-klhl24質(zhì)粒轉(zhuǎn)染hek293t細(xì)胞，孵育；

80、(c)將待篩選的物質(zhì)與步驟(b)的細(xì)胞混合，共孵育；

81、(d)檢測(cè)步驟(c)所得孵育體系的熒光信號(hào)。

82、在本發(fā)明第五方面，提供一種klhl24泛素連接酶抑制劑的篩選系統(tǒng)(如試劑盒)，其包含：表達(dá)標(biāo)記熒光蛋白的klhl24的細(xì)胞(如第四方面所述)。

83、具體地，所述篩選系統(tǒng)還包含孵育細(xì)胞所用試劑，如培養(yǎng)基。

84、具體地，所述篩選系統(tǒng)還包含孵育細(xì)胞所用容器，如96孔板或384孔板。

85、具體地，所述篩選系統(tǒng)還包含檢測(cè)熒光信號(hào)所用試劑，如細(xì)胞固定試劑(如多聚甲醛)、細(xì)胞洗液、染色液等。

86、在本發(fā)明第六方面，提供第五方面所述的篩選系統(tǒng)在篩選klhl24泛素連接酶抑制劑、用于治療klhl24相關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用。

87、在本發(fā)明第七方面，提供一種預(yù)防和/或治療klhl24相關(guān)的疾病的方法，其包括向有此需要的受試者施用本發(fā)明第一方面所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體、酯、前藥、溶劑化物或氘代化合物。

88、進(jìn)一步地，所述klhl24相關(guān)的疾病具有本發(fā)明第二方面所述疾病的定義。

89、進(jìn)一步地，所述受試者為哺乳動(dòng)物，特別是人類。

90、進(jìn)一步地，所述施用可以采用任何合適的給藥途徑，例如胃腸道給藥(例如口服、舌下、直腸給藥)或非胃腸道給藥(例如，靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、眼內(nèi)、腦內(nèi)、陰道內(nèi)、腹腔、透皮、皮下、皮內(nèi)、滴注、呼吸道給藥等)途徑。

91、在本發(fā)明第八方面，提供一種維持毛發(fā)的方法，其包括向有此需要的受試者施用本發(fā)明第一方面所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體、酯、前藥、溶劑化物或氘代化合物。

92、進(jìn)一步地，所述受試者為哺乳動(dòng)物，特別是人類，包括健康人和患者。

93、進(jìn)一步地，所述維持毛發(fā)包括促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)、促進(jìn)毛發(fā)再生和自我修復(fù)、延長(zhǎng)毛發(fā)生長(zhǎng)周期、防止脫發(fā)等。

94、進(jìn)一步地，所述施用可以采用任何合適的給藥途徑，例如胃腸道給藥(例如口服、舌下、直腸給藥)或非胃腸道給藥(例如，靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、眼內(nèi)、腦內(nèi)、陰道內(nèi)、腹腔、透皮、皮下、皮內(nèi)、滴注、呼吸道給藥等)途徑。

95、本發(fā)明設(shè)計(jì)了一種klhl24泛素連接酶抑制劑的高通量篩選方法和系統(tǒng)，其穩(wěn)定性高，可重復(fù)性好，有助于高效篩選klhl24泛素連接酶抑制劑及其相關(guān)藥物的開發(fā)。基于前述方法，本發(fā)明篩選到了一些klhl24泛素連接酶抑制劑，其可有效用于klhl24相關(guān)的疾病(例如klhl24突變導(dǎo)致的疾病，如遺傳性大皰性表皮松懈癥、擴(kuò)張型心肌病、脫發(fā)、萎縮性瘢痕癥等)的治療，具有非常好的應(yīng)用前景。鑒于klhl24在皮膚和毛發(fā)再生方面的功能，該抑制劑在維持正常毛發(fā)方面也有較好的應(yīng)用前景。